MiRNA和miR-146a在托吡酯治疗颞叶癫痫的临床意义

【摘要】研究背景：癫痫是一种常见的神经失调症,并以反复自发异常的神经元放电为主要特点,目前抗癫痫药物的使用是治疗颞叶癫痫最重要的手段,托吡酯(TPM)则是其中最有效的抗癫痫药物之一,然而TPM治疗癫痫的具体机制尚未明确。MicroRNAs(miRNAs)一种非编码单链小分子RNA,近几年的研究表明它不仅对神经发育产生影响,还有研究表明它会参与到癫痫的发生发展中,但是其具体机制尚不明确。结合国内外的许多研究并未发现miRNAs与TPM治疗癫痫机制的相关论文,这为明确癫痫发病机制和TPM治疗癫痫的机制提供了基础。本实验旨在探讨microRNAs(miRNAs)在颞叶癫痫中的表达谱改变,并通过锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型制备,阐述TPM对于癫痫大鼠海马凋亡的影响和机制。材料和方法：将大鼠随机分为四组：1)正常对照组,2)颞叶癫痫组,3)TPM低剂量组(40mg/kg),4)TPM高剂量组(80mg/kg)。通过基因芯片分析技术测定miRNAs在上述四组中的表达谱改变,H&E染色观察各组大鼠海马组织与细胞的形态学改变,并利用免疫蛋白印迹,免疫组化以及免疫荧光等方法测定上述各组海马中caspase-8蛋白的表达水平。结果：与对照组相比,TLE大鼠海马中检测到了12个上调的miRNAs(miR-146a,-183,-204,-210,-339,-34b,351,-429,-455,466b,-503,and-532)和15个下调的miRNAs(miR-34a,-383,-451,-101a,-488,-499,-300,-551b,-380,-592,-598,-741,-7b,-374,and-9)。在使用TPM治疗后,12个上调的miRNAs发生了下调,15个下调的miRNAs则出现了上调。miR-146a是上调的miRNAs中变化最明显的。这一结果阐明,TPM能够通过主要下调miR-146a的表达治疗癫痫。另外,在TLE大鼠海马中可以检测到caspase-8的表达水平明显增加,但是经TPM治疗后,其表达水平下降,证实了TPM能够通过下调caspase-8的表达抑制TLE大鼠海马细胞的凋亡,同时还发现,低剂量TPM处理组中大鼠海马caspase-8的表达较高剂量TPM处理组更低,表明低剂量TPM的对大鼠癫痫的疗效比高剂量TPM更好。通过对大鼠海马组织上述各组的免疫组化、免疫荧光和H&E染色结果分析发现,癫痫大鼠的海马中DG区的损伤最为严重,其次为CA3区,但是经过治疗后,其死亡的神经元细胞明显减少,证实了TPM的疗效显著,且TPM低剂量的效果较TPM高剂量更为明显,这与免疫蛋白印迹的结果一致。结论：1)TPM可以通过下调caspase-8的表达抑制癫痫小鼠海马细胞凋亡的发生；2)在TLE的发生发展过程中存在miRNAs特异表达谱,其中miR-146a在TPM治疗TLE过程中具有明显作用,有望成为TLE治疗的分子靶点。
【作者】李今子；
【导师】林贞花；
【作者基本信息】延边大学，病理学与病理生理学，2014，博士
【关键词】颞叶癫痫；miR-146a；托吡酯；Caspase-8；

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